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数学代写|数学建模代写math modelling代考|Bacterial Strain and Plasmid
The host-plasmid combination was $E$. coli $\mathrm{DH} 5 \alpha$ transformed with the plasmid pVAX-NH36 (Invitrogen by Life Technologies, USA), which contains DNA fragment encoded NH36 antigen of Leishmania donovani [15]. pVAX-NH36 contains kan+ and a pUC origin (pMB1-derived) for high-copy number replication [16].
E. coli DH5 $\alpha-\mathrm{pVAX1-NH36}$ was propagated on LB agar plates with soy peptone and kanamycin $(50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL})$. A single colony from this plate was used to inoculate a $1000 \mathrm{~mL}$ baffled flask with aeration system containing $200 \mathrm{~mL}$ of chemically defined mineral medium (CDMM, described below) plus glycerol $12.5 \mathrm{~g} / \mathrm{L}$. The shake flask was incubated in an orbital shaker (New Brunswick, USA) carried out at $30^{\circ} \mathrm{C}, 250 \mathrm{rpm}$ and $0.5 \mathrm{vvm}$. As cell cryo-protection, $20 \mathrm{~mL}$ of glycerol $80 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v})$ was added when the culture reached an optical density (OD600nm) of 8 and aliquots of $10 \mathrm{~mL}$ were frozen immediately on dry ice and store at $-70^{\circ} \mathrm{C}$ (CDMM seed bank).
Medium and Inoculum
The CDMM for growth E. coli DH5 $\alpha$ previously modified [5] had the following composition $(\mathrm{g} / \mathrm{L}): \mathrm{K}_2 \mathrm{HPO}_4, 5.8 ; \mathrm{KH}_2 \mathrm{PO}_4$. 7.5; antifoam 204, $0.125 ;\left(\mathrm{NH}_4\right)_2 \mathrm{SO}_4, 5.92 ; \mathrm{MgSO}_4 .7 \mathrm{H}_2 \mathrm{O}, 2.3 ; \mathrm{NaCl}, 2 ; \mathrm{FeCl} .6 \mathrm{H}_2 \mathrm{O}, 2.85 \mathrm{mg}$; and $14.7 \mathrm{~mL}$ of trace mineral solution (TMS). The composition of TMS was the following, in $\mathrm{g} / \mathrm{L}: 2 \mathrm{~g} \mathrm{ZnCl}_2 .4 \mathrm{H}_2 \mathrm{O}, 2$ CoCl. $6 \mathrm{H}_2 \mathrm{O}, 2 \mathrm{~g}$ $\mathrm{Na}_2 \mathrm{MoO}_4 .2 \mathrm{H}_2 \mathrm{O}, 1.9 \mathrm{~g} \mathrm{CuCl}_2 .2 \mathrm{H}_2 \mathrm{O}, 1.6 \mathrm{~g} \mathrm{H}_3 \mathrm{BO}_3, 1.6 \mathrm{~g} \mathrm{MnSO} \cdot \mathrm{H}_2 \mathrm{O}, 0.6$ $\mathrm{g}$ citric acid, and $1 \mathrm{~g} \mathrm{CaCl}_2$. The fermentations were performed with CDMM plus glycerol and thiamine $25 \mathrm{~g} / \mathrm{L}$ and $40 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL}$, respectively.
Cultivation
Duplicated fermentations were carried out in a $2 \mathrm{~L}$ jar bioreactor containing $1 \mathrm{~L}$ of CDMM plus $200 \mathrm{~mL}$ of inoculum and carried out at $37^{\circ} \mathrm{C}, 1200 \mathrm{rpm}, 1 \mathrm{vvm}$. The dissolved oxygen concentration was maintained above $30 \%$ air saturation by enriching air with pure oxygen. The experiments were carried out in isothermal conditions at $30,33,35$, 40 and $42^{\circ} \mathrm{C}$ and monitored by removing $5 \mathrm{~mL}$ samples every $1 \mathrm{~h}$ for DCW, glycerol, plasmid, NPT II and organic acids (acetate, lactate, formate and succinate). Data obtained at $37^{\circ} \mathrm{C}$ were used to perform a nonlinear parameter adjustment by the Levenberg-Marquardt algorithm.
数学代写|数学建模代写math modelling代考|DCW and Glycerol Determination
A calibration curve built previously $\left(\mathrm{gDCW} / \mathrm{L}=0.38 \times \mathrm{OD}{600 \mathrm{~mm}}\right.$ provided that $\left.\mathrm{OD}{600}<0.4\right)$ to determine the DCW using an appropriate sample dilution. To generate the calibration curve, samples of $10 \mathrm{~mL}$ were centrifuged in a Sorval centrifuge at $10,000 \mathrm{rpm}$ and $4^{\circ} \mathrm{C}$ for $10 \mathrm{~min}$, washed with distillated water and dried oven overnight at $85^{\circ} \mathrm{C}$ to determine DCW, to the other hand, the supernatant was used for glycerol quantification using a spectrophotometric method [17].
Plasmid DNA Quantification
pDNA quantification was determine using $300 \mu \mathrm{g}$ of DCW washed and centrifuged at $10,000 \mathrm{rpm}$ at $4^{\circ} \mathrm{C}$ for $10 \mathrm{~min}$, next, the pellet of each sample was stored at $-20^{\circ} \mathrm{C}$ for plasmid analysis. pDNA extraction was carried out according to manufacturer’s instructions using a QIAprep Spin Miniprep Kit (Quiagen, Hilden, Germany). The pDNA concentration from $300 \mu \mathrm{g}$ of DCW in purified solution was measured spectrophotometrically at OD260nm and OD280nm using the Nano-Drop UV spectrophotometer ND-1000 (NanoDrop, Wilmington,DE) and correlation of $\mathrm{OD}_{260 \mathrm{~mm}}=1$, which corresponds to $\mathrm{Cp}$ of $50 \mathrm{mg} / \mathrm{L}$ in the purified solution was used to calculate the concentration.
NPT II and Organic Acids Quantification
Determination of NTP II was done by ELISA, taking $1 \mathrm{~mL}$ of each sample and centrifuged at $10000 \mathrm{rpm}$ for $10 \mathrm{~min}$ at $4^{\circ} \mathrm{C}$ to obtain cellular extract. The pellets were re-suspended at same initial volume in extraction buffer (50 mM Tris-HCl from Bio- $\mathrm{Rad} \mathrm{pH} 7.4,200 \mathrm{mM} \mathrm{NaCl}$ from J.T Baker, $15 \mathrm{mM}$ EDTA from Bio-Rad, $100 \mu \mathrm{M}$ PMSF from Sigma-Aldrich). Samples were sonicated by a cycle of $50 \%$ amplitude for $45 \mathrm{~s}$, shut off for $1 \mathrm{~min}$ and re-start until complete 4 cycles. $100 \mu \mathrm{L}$ of cell extracts were added to each well in duplicated of the microtiter plate were incubated for $2 \mathrm{~h}$ at $37^{\circ} \mathrm{C}$ followed by washing three times with $300 \mu \mathrm{L}$ wash buffer (phosphate-buffered saline (PBS) solution plus 0.05\% Tween 20 from GE Healthcare), PBS solution contains $137 \mathrm{mM} \mathrm{NaCl}, 2.7 \mathrm{mM} \mathrm{KCl}, 10 \mathrm{mM}$ $\mathrm{Na}_2 \mathrm{HPO}_4, 2 \mathrm{mM} \mathrm{KH} \mathrm{PO}_4$ from J.T Baker, and the wells were blocked with $100 \mu \mathrm{L}$ of block buffer solution (wash buffer solution plus $3 \%$ Skim Milk from Difco) at $37^{\circ} \mathrm{C}$ for $1 \mathrm{~h}$ and washed five times again. After these washes, $100 \mu \mathrm{L}$ anti-Neomycin Phosphotransferase II antibody from rabbit (Merck Millipore, USA), which had been diluted 1:200 was added and incubated for $1 \mathrm{~h}$ at $37^{\circ} \mathrm{C}$, and then each well was washed five times. 100 $\mu \mathrm{L}$ goat anti-rabbit IgG, $(\mathrm{H}+\mathrm{L}) \mathrm{HRP}$ conjugate from Merck Millipore (USA) which had been diluted 1:2000 was added and incubated for $1 \mathrm{~h}$ at $37^{\circ} \mathrm{C}$. The wells were washed and $100 \mu \mathrm{L}$ of peroxidase substrate solution was added, to stop the reaction, $100 \mu \mathrm{L}$ of stop solution was added to each well, and the absorbance was read at $492 \mathrm{~nm}$ in a Multiskan EX from Labsystems (USA). Organic acids were analyzed in the supernatants using a HPLC Varian PS-430 (Agilent Technologies., Santa Clara, CA), as detailed elsewhere [18].
数学建模代写
数学代写|数学建模代写math modelling代考|Bacterial Strain and Plasmid
宿主-质粒组合为$E$。大肠杆菌$\mathrm{DH} 5 \alpha$转化质粒pVAX-NH36 (Invitrogen by Life Technologies, USA)，其中含有编码利什曼原虫NH36抗原的DNA片段[15]。pVAX-NH36含有kan+和pUC起源(pmb1衍生)，用于高拷贝数复制[16]。
大肠杆菌DH5 $\alpha-\mathrm{pVAX1-NH36}$在含有大豆蛋白胨和卡那霉素$(50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL})$的LB琼脂板上繁殖。用该平板上的单个菌落接种$1000 \mathrm{~mL}$折流瓶，该折流瓶的曝气系统含有$200 \mathrm{~mL}$化学定义的矿物培养基(CDMM，如下所述)和甘油$12.5 \mathrm{~g} / \mathrm{L}$。摇瓶在轨道摇床(New Brunswick, USA)中孵育，网址为$30^{\circ} \mathrm{C}, 250 \mathrm{rpm}$和$0.5 \mathrm{vvm}$。作为细胞冷冻保护，当培养达到光密度(OD600nm) 8时，加入甘油$80 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v})$$20 \mathrm{~mL}$，并立即将等量的$10 \mathrm{~mL}$冷冻在干冰上并保存在$-70^{\circ} \mathrm{C}$ (CDMM种子库)。
培养基和接种物
先前修改的[5]大肠杆菌DH5生长CDMM $\alpha$的组成如下$(\mathrm{g} / \mathrm{L}): \mathrm{K}_2 \mathrm{HPO}_4, 5.8 ; \mathrm{KH}_2 \mathrm{PO}_4$。7.5;消泡剂204,$0.125 ;\left(\mathrm{NH}_4\right)_2 \mathrm{SO}_4, 5.92 ; \mathrm{MgSO}_4 .7 \mathrm{H}_2 \mathrm{O}, 2.3 ; \mathrm{NaCl}, 2 ; \mathrm{FeCl} .6 \mathrm{H}_2 \mathrm{O}, 2.85 \mathrm{mg}$;和$14.7 \mathrm{~mL}$微量矿物质溶液(TMS)。经颅磁刺激剂的组成如下，在$\mathrm{g} / \mathrm{L}: 2 \mathrm{~g} \mathrm{ZnCl}_2 .4 \mathrm{H}_2 \mathrm{O}, 2$ CoCl中。$6 \mathrm{H}_2 \mathrm{O}, 2 \mathrm{~g}$$\mathrm{Na}_2 \mathrm{MoO}_4 .2 \mathrm{H}_2 \mathrm{O}, 1.9 \mathrm{~g} \mathrm{CuCl}_2 .2 \mathrm{H}_2 \mathrm{O}, 1.6 \mathrm{~g} \mathrm{H}_3 \mathrm{BO}_3, 1.6 \mathrm{~g} \mathrm{MnSO} \cdot \mathrm{H}_2 \mathrm{O}, 0.6$$\mathrm{g}$柠檬酸，$1 \mathrm{~g} \mathrm{CaCl}_2$。分别用CDMM加甘油和硫胺素$25 \mathrm{~g} / \mathrm{L}$和$40 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL}$进行发酵。
培养
在含有$1 \mathrm{~L}$的CDMM和$200 \mathrm{~mL}$的接种物的$2 \mathrm{~L}$罐式生物反应器中进行重复发酵，并在$37^{\circ} \mathrm{C}, 1200 \mathrm{rpm}, 1 \mathrm{vvm}$进行。通过向空气中添加纯氧，使溶解氧浓度保持在$30 \%$空气饱和度以上。实验在$30,33,35$、40和$42^{\circ} \mathrm{C}$等温条件下进行，并通过每$1 \mathrm{~h}$次去除$5 \mathrm{~mL}$样品中的DCW、甘油、质粒、NPT II和有机酸(乙酸、乳酸、甲酸和琥珀酸)进行监测。在$37^{\circ} \mathrm{C}$上获得的数据被用于通过Levenberg-Marquardt算法进行非线性参数调整。
数学代写|数学建模代写math modelling代考|DCW and Glycerol Determination
先前建立的校准曲线 $\left(\mathrm{gDCW} / \mathrm{L}=0.38 \times \mathrm{OD}{600 \mathrm{~mm}}\right.$ 前提是 $\left.\mathrm{OD}{600}<0.4\right)$ 以确定DCW使用适当的样品稀释。的样本生成校准曲线 $10 \mathrm{~mL}$ 在Sorval离心机中离心 $10,000 \mathrm{rpm}$ 和 $4^{\circ} \mathrm{C}$ 为了 $10 \mathrm{~min}$，用蒸馏水洗净，放入烤箱烘干过夜 $85^{\circ} \mathrm{C}$ 另一方面，将上清液用分光光度法定量甘油[17]。
质粒DNA定量
测定pDNA定量 $300 \mu \mathrm{g}$ 的DCW洗涤并离心 $10,000 \mathrm{rpm}$ 在 $4^{\circ} \mathrm{C}$ 为了 $10 \mathrm{~min}$，然后，将每个样品的颗粒储存在 $-20^{\circ} \mathrm{C}$ 质粒分析。根据制造商的说明，使用QIAprep Spin Miniprep试剂盒(Quiagen, Hilden, Germany)进行pDNA提取。pDNA浓度 $300 \mu \mathrm{g}$ 采用纳米滴紫外分光光度计ND-1000 (NanoDrop, Wilmington,DE)在OD260nm和OD280nm处测定纯化溶液中DCW的含量 $\mathrm{OD}_{260 \mathrm{~mm}}=1$，对应于 $\mathrm{Cp}$ 的 $50 \mathrm{mg} / \mathrm{L}$ 在纯化后的溶液中用来计算浓度。
NPT II和有机酸定量
采用ELISA法测定NTP II，每个样品取$1 \mathrm{~mL}$，在$10000 \mathrm{rpm}$离心，$10 \mathrm{~min}$离心，$4^{\circ} \mathrm{C}$离心，得到细胞提取物。将微球以相同的初始体积重新悬浮在萃取缓冲液中(50 mM Tris-HCl来自Bio- $\mathrm{Rad} \mathrm{pH} 7.4,200 \mathrm{mM} \mathrm{NaCl}$, Bio- rad来自$15 \mathrm{mM}$ EDTA, Sigma-Aldrich来自$100 \mu \mathrm{M}$ PMSF)。对$45 \mathrm{~s}$进行$50 \%$振幅周期的超声处理，对$1 \mathrm{~min}$进行关闭并重新启动，直到完成4个周期。将细胞提取物$100 \mu \mathrm{L}$加入到每个孔中，在重复的微滴板中，在$37^{\circ} \mathrm{C}$孵育$2 \mathrm{~h}$，然后用$300 \mu \mathrm{L}$洗涤缓冲液(GE Healthcare公司的磷酸盐缓冲盐水(PBS)溶液加0.05％ Tween 20)洗涤三次，PBS溶液含有J.T Baker公司的$137 \mathrm{mM} \mathrm{NaCl}, 2.7 \mathrm{mM} \mathrm{KCl}, 10 \mathrm{mM}$$\mathrm{Na}_2 \mathrm{HPO}_4, 2 \mathrm{mM} \mathrm{KH} \mathrm{PO}_4$，并用$100 \mu \mathrm{L}$块缓冲液(洗涤缓冲液加$3 \%$脱脂牛奶)在$37^{\circ} \mathrm{C}$处($1 \mathrm{~h}$)封孔，再洗5次。洗后，加入$100 \mu \mathrm{L}$兔抗新霉素磷酸转移酶II抗体(Merck Millipore, USA)，稀释1:20 00，在$37^{\circ} \mathrm{C}$孵育$1 \mathrm{~h}$，然后每孔洗5次。加入100只$\mu \mathrm{L}$山羊抗兔IgG, $(\mathrm{H}+\mathrm{L}) \mathrm{HRP}$偶联物，来自美国默克密理博公司，稀释1:2000，在$37^{\circ} \mathrm{C}$孵育$1 \mathrm{~h}$。清洗孔，加入$100 \mu \mathrm{L}$过氧化物酶底物溶液，停止反应，每孔加入$100 \mu \mathrm{L}$过氧化物酶底物溶液，在$492 \mathrm{~nm}$处用Labsystems(美国)的Multiskan EX读取吸光度。上清液中有机酸的分析采用高效液相色谱法Varian PS-430 (Agilent Technologies)。， Santa Clara, CA)，详见其他地方[18]。
统计代写请认准statistics-lab™. statistics-lab™为您的留学生涯保驾护航。
金融工程代写
金融工程是使用数学技术来解决金融问题。金融工程使用计算机科学、统计学、经济学和应用数学领域的工具和知识来解决当前的金融问题，以及设计新的和创新的金融产品。
非参数统计代写
非参数统计指的是一种统计方法，其中不假设数据来自于由少数参数决定的规定模型；这种模型的例子包括正态分布模型和线性回归模型。
广义线性模型代考
广义线性模型（GLM）归属统计学领域，是一种应用灵活的线性回归模型。该模型允许因变量的偏差分布有除了正态分布之外的其它分布。
术语 广义线性模型（GLM）通常是指给定连续和/或分类预测因素的连续响应变量的常规线性回归模型。它包括多元线性回归，以及方差分析和方差分析（仅含固定效应）。
有限元方法代写
有限元方法（FEM）是一种流行的方法，用于数值解决工程和数学建模中出现的微分方程。典型的问题领域包括结构分析、传热、流体流动、质量运输和电磁势等传统领域。
有限元是一种通用的数值方法，用于解决两个或三个空间变量的偏微分方程（即一些边界值问题）。为了解决一个问题，有限元将一个大系统细分为更小、更简单的部分，称为有限元。这是通过在空间维度上的特定空间离散化来实现的，它是通过构建对象的网格来实现的：用于求解的数值域，它有有限数量的点。边界值问题的有限元方法表述最终导致一个代数方程组。该方法在域上对未知函数进行逼近。[1] 然后将模拟这些有限元的简单方程组合成一个更大的方程系统，以模拟整个问题。然后，有限元通过变化微积分使相关的误差函数最小化来逼近一个解决方案。
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随机分析代写
随机微积分是数学的一个分支，对随机过程进行操作。它允许为随机过程的积分定义一个关于随机过程的一致的积分理论。这个领域是由日本数学家伊藤清在第二次世界大战期间创建并开始的。
时间序列分析代写
随机过程，是依赖于参数的一组随机变量的全体，参数通常是时间。 随机变量是随机现象的数量表现，其时间序列是一组按照时间发生先后顺序进行排列的数据点序列。通常一组时间序列的时间间隔为一恒定值（如1秒，5分钟，12小时，7天，1年），因此时间序列可以作为离散时间数据进行分析处理。研究时间序列数据的意义在于现实中，往往需要研究某个事物其随时间发展变化的规律。这就需要通过研究该事物过去发展的历史记录，以得到其自身发展的规律。
回归分析代写
多元回归分析渐进（Multiple Regression Analysis Asymptotics）属于计量经济学领域，主要是一种数学上的统计分析方法，可以分析复杂情况下各影响因素的数学关系，在自然科学、社会和经济学等多个领域内应用广泛。
MATLAB代写
MATLAB 是一种用于技术计算的高性能语言。它将计算、可视化和编程集成在一个易于使用的环境中，其中问题和解决方案以熟悉的数学符号表示。典型用途包括：数学和计算算法开发建模、仿真和原型制作数据分析、探索和可视化科学和工程图形应用程序开发，包括图形用户界面构建MATLAB 是一个交互式系统，其基本数据元素是一个不需要维度的数组。这使您可以解决许多技术计算问题，尤其是那些具有矩阵和向量公式的问题，而只需用 C 或 Fortran 等标量非交互式语言编写程序所需的时间的一小部分。MATLAB 名称代表矩阵实验室。MATLAB 最初的编写目的是提供对由 LINPACK 和 EISPACK 项目开发的矩阵软件的轻松访问，这两个项目共同代表了矩阵计算软件的最新技术。MATLAB 经过多年的发展，得到了许多用户的投入。在大学环境中，它是数学、工程和科学入门和高级课程的标准教学工具。在工业领域，MATLAB 是高效研究、开发和分析的首选工具。MATLAB 具有一系列称为工具箱的特定于应用程序的解决方案。对于大多数 MATLAB 用户来说非常重要，工具箱允许您学习和应用专业技术。工具箱是 MATLAB 函数（M 文件）的综合集合，可扩展 MATLAB 环境以解决特定类别的问题。可用工具箱的领域包括信号处理、控制系统、神经网络、模糊逻辑、小波、仿真等。